非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)或稱為活性電泳是在不參加SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下，對(duì)堅(jiān)持活性的蛋白質(zhì)進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于酶的判定、同非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
聚丙烯酰胺凝膠電泳
工酶剖析和提純。未加SDS的天然非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳能夠使生物大分子在電泳過(guò)程中堅(jiān)持其天然的形狀和電荷，它們的別離是依據(jù)其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用，因而能夠得到較高的分辨率，尤其是在電泳別離后仍能堅(jiān)持蛋白質(zhì)和酶等生物大分子的生物活性，關(guān)于生物大分子的判定有重要意義，其辦法是在凝膠上進(jìn)行兩份一樣樣品的電泳，電泳后將凝膠切成兩半，一半用于活性染色，對(duì)某個(gè)特定的生物大分子進(jìn)行判定，另一半用于一切樣品的染色，以剖析樣品中各種生物大分子的種類和含量。
非變性聚丙烯酰胺凝膠和變性SDS-PAGE電泳在操作上基本上是一樣的，只對(duì)錯(cuò)變性聚丙烯酰胺凝膠的制造和電泳緩沖液中不能含有變性劑如SDS等。通常蛋白進(jìn)行非變性凝膠電泳要先辨明是堿性仍是酸性蛋白。別離堿性蛋白時(shí)分，要運(yùn)用低pH凝膠體系，別離酸性蛋白時(shí)分，要運(yùn)用高pH凝膠體系。 酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中選用的pH是8.8的緩沖體系，蛋白會(huì)帶負(fù)電荷，蛋白會(huì)向陽(yáng)極移動(dòng)；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進(jìn)行，蛋白帶正電荷，這時(shí)分需要將陰極和陽(yáng)極倒置才能夠電泳別離堿性蛋白。
非變性凝膠里邊沒(méi)加變性劑，通常是SDS。非變性膠跑出來(lái)的蛋白能堅(jiān)持其活性通常用做功用實(shí)驗(yàn)，如EMSA。因?yàn)闆](méi)有變性劑的原因非變性膠電泳時(shí)除了與蛋白分子量有關(guān)也會(huì)受都電荷的影響，因而對(duì)蛋白等電點(diǎn)的斷定和緩沖液的酸堿性有注意，有時(shí)需要倒轉(zhuǎn)電泳時(shí)的正負(fù)極。從跑的膠來(lái)看，變性膠會(huì)比較美觀，帶比較窄，非變性膠跑出來(lái)則比較粗糙。
1. 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的過(guò)程中，蛋白質(zhì)的遷移率不只和蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有關(guān)，還和蛋白質(zhì)的分子量以及分子形狀有關(guān)，其間蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)是最重要
的影響因子，要依據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)來(lái)挑選對(duì)應(yīng)的電泳緩沖體系；
2. 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的過(guò)程中，要注意電壓過(guò)高致使發(fā)熱而致使蛋白質(zhì)變性，所以最好在電泳槽外面放置冰塊以降低溫度；
3. 蛋白質(zhì)的分子量較大，則電泳時(shí)刻能夠恰當(dāng)延伸，以使意圖蛋白質(zhì)有滿足的遷移率和其它的蛋白質(zhì)分隔，反之亦然;
4. 變性樣品的離子強(qiáng)度不能太高。
聚丙烯酰胺凝膠電泳用于別離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。 作用原理 聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)。它有兩種方式：非變性聚丙烯酰胺凝膠及SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過(guò)程中，蛋白質(zhì)能夠堅(jiān)持完好狀況，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量巨細(xì)、蛋白質(zhì)的形狀及其所順便的電荷量而逐步呈梯度分隔。 依據(jù)浙大哲博檢查的別離經(jīng)歷，能夠發(fā)現(xiàn)下列疑問(wèn)最為簡(jiǎn)單呈現(xiàn)：
1. pH對(duì)全部反應(yīng)體系的影響是至關(guān)重要的.SDS－PAGE不接連電泳中，制膠緩沖液運(yùn)用的是Tris－HCL緩沖體系，濃縮膠是pH6.7，別離膠pH8.9；而電泳緩沖液運(yùn)用的Tris－甘氨酸緩沖體系。在濃縮膠中，其pH環(huán)境呈弱酸性，因而甘氨酸解離很少，其在電場(chǎng)的作用下，泳動(dòng)功率低；而CL離子卻很高，兩者之間構(gòu)成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動(dòng)。因?yàn)閷?dǎo)電性與電場(chǎng)強(qiáng)度成反比，這一區(qū)帶便構(gòu)成了較高的電壓梯度，壓著蛋白質(zhì)分子集合到一同，濃縮為一狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品進(jìn)入別離膠后，因?yàn)槟z中pH的添加，呈堿性，甘氨酸很多解離，泳動(dòng)速率添加，直接緊隨氯離子以后，一起因?yàn)閯e離膠孔徑的減小，在電場(chǎng)的作用下，蛋白分子依據(jù)其固有的帶電性和分子巨細(xì)進(jìn)行別離。
2. 依據(jù)樣品別離意圖不同，主要有三種處置辦法：復(fù)原SDS處置、非復(fù)原SDS處置、帶有烷基化作用的復(fù)原SDS處置。
3.聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺與為蛋白質(zhì)電泳供給載體，其凝結(jié)的好壞直接關(guān)系到電泳成功與否，與促凝劑及環(huán)境密切相關(guān)。
4. 呈現(xiàn)拖尾現(xiàn)主要是樣品融解作用欠安或別離膠濃度過(guò)大致使的。
5.通常膠在30MIN-1H內(nèi)凝。假如凝的太慢，可能是TEMED，APS劑量不夠或許失效。APS大概現(xiàn)配現(xiàn)用，TEMED不穩(wěn)定，易被氧化成黃色。假如凝的太快，可能是APS和TEMED用量過(guò)多，此刻膠太硬易裂，電泳時(shí)易燒膠。
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